铜仁市2025年高三年级第三次模拟(铜仁三模)生物答案!于2025-04-10发布开考，目前2024炎德英才试卷答案网已经汇总了铜仁市2025年高三年级第三次模拟(铜仁三模)生物答案!的各科答案和试卷，更多2024炎德英才大联考试卷答案请关注本网站。

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20. 环境雌激素来源于各种农药、防晒剂等，进入水体会影响野生生物的种群数量。研究人员利用基因工程构建能够监测环境中雌激素的转基因荧光斑马鱼。已知卵黄蛋白原基因在环境雌激素诱导下能够特异性表达，斑马鱼幼鱼时期鱼体透明，转入荧光蛋白基因，在特定条件下能发出荧光。请回答下列问题：
（1）pEGFP-1质粒是一种无启动子的绿色荧光蛋白载体（图1），研究人员首先需将卵黄蛋白原基因的启动子与质粒重组在一起，为保证启动子与质粒的正确连接，需要使用______（填具体的酶）对pEGFP-1质粒进行酶切。
（2）PCR反应需要在一定的缓冲液中才能进行，缓冲液中需要加入引物和，其中引物的作用是______。除此之外，缓冲液中还需要加入______。
（3）卵黄蛋白原基因启动子上并无限制酶切位点，因此在进行PCR时需要添加限制酶切位点。已知卵黄蛋白原基因启动子的序列如图2所示，在PCR扩增启动子时，所用引物的序列是______（写出上游引物的12个碱基）。
（限制酶识别序列及切割位点：Hind Ⅲ： Bg1 Ⅱ：
BamH I： Stu I：）
（4）构建好的基因表达载体需要通过______的方法导入斑马鱼______细胞中，才能获得转基因斑马鱼个体。

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