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(2) 延伸 使两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合
(3)防止目的基因反向连接以及防止线性化质粒或目的基因自身环化
(4) DNA连接酶 农杆菌转化法 不受限制酶切位点的限制；可以把目的基因插入任何位点；避免限制酶切割对质粒功能区的破坏等
22．(1)稀释涂布平板法
(2)允许能降解淀粉的微生物生长，而抑制或阻止其他微生物生长（或筛选得到能高效降解淀粉的微生物）
(3) ② 硝化细菌为自养细菌能够利用空气中的二氧化碳合成有机物（或硝化细菌能通过化能合成作用合成有机物），但硝化细菌不能产生淀粉酶分解淀粉，所以无透明圈
(4)首先取菌液进行梯度稀释，之后接种在以脂肪为唯一碳源的培养基上，筛选出脂肪分解菌；再将筛选出的脂肪分解菌接种到以纤维素为唯一碳源的培养基上，筛选出能同时降解脂肪和纤维素的菌种

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