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EcoR Ⅰ C↓AATTC
Sma Ⅰ CCC↓GGG
①分析表、图甲,应选用 酶切割质粒和hADH1B基因片段。
②依据图乙中的原理,用碱性磷酸单酯酶处理酶切后的质粒(使﹣P变成﹣OH),这样可防止质粒的 。
③若将上述处理后的质粒与酶切后的hADH1B基因片段连接,由于﹣OH与﹣OH不能连接而形成2个切口的重组DNA。设计合理的引物进行PCR,至少扩增 轮后,再通过DNA连接酶处理可获得无切口的环状重组DNA(基因表达载体)。
④但上述实验不能避免目的基因的反向连接,请补充下面的实验方案,确定出目的基因的连接方向。
实验方案:先将基因表达载体进行EcoR Ⅰ的单酶切,然后通过 电泳分离鉴定。
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